Для проведения пробы геллера используют раствор. Качественное определение белка в моче

Принцип выявления белка основан на его денатурации под воздействием денатурирующего фактора - концентрированной азотной кислоты или реактива Ларионовой.

Следует отметить, что в моче всегда присутствует некоторое количество белка, но, как правило, его концентрация в моче здорового человека ниже порога чувствительности качественной реакции и не выявляется простыми методами. Для количеств белка свыше 0,033 г/л проба непригодна. При более высоких концентрациях необходимо разбавлять мочу или использовать альбуминометр Эсбаха.

Для определения количества общего белка в моче используются метод, основанный на пробе Геллера - метод Брандберга-Робертса-Стольникова (W. Roberts, 1830-1899, англ. терапевт). Методика предполагает разведение мочи до нижнего предела чувствительности пробы (0,033 г/л) и времени образования кольца в 2-3 минуты.

Ход выполнения анализа

Реактивы: концентрированная (дымящаяся) азотная кислота или реактив Ларионовой. Исследуемая моча должна быть прозрачной и иметь кислую реакцию.

Приготовление реактива Ларионовой

Приготавливают насыщенный раствор хлорида натрия (20-30 г соли растворяют в 100 мл теплой воды, дают отстояться до охлаждения). Надосадочную жидкость сливают и фильтруют. К 99 мл фильтрата добавляют 1 мл концентрированной азотной кислоты (можно заменить 2 мл соляной кислоты).

Техника исследования

В пробирку с 1-2 мл реактива осторожно по стенке наслаивают примерно такое же количество мочи. При наличии белка, примерно через 2-3 минуты, на границе раздела жидкостей наблюдается помутнение - белое кольцо из денатурировашего белка.

Ложноположительный результат может появиться при использовании азотной кислоты, за счет высокой концентрации нуклеоальбуминов или солей уратов. В первом случае оно исчезает при легком покачивании пробирки, а во втором кольцо располагается значительно выше границы раздела сред и исчезает при нагревании; при повторении пробы с разбавленной мочой кольцо не образуется. Иногда также появляется коричневатое пигментное кольцо от окисления урохрома азотной кислотой.

Использование реактива Ларионовой, в отличие от азотной кислоты, имеет ряд преимуществ: на границе наслоения не образуется пигментных колец, а положительный результат дает более четкие белковые кольца.

См. также

Ссылки

Литература

Wikimedia Foundation . 2010 .

Смотреть что такое "Проба Геллера" в других словарях:

ГЕЛЛЕРА ПРОБА - на белок (Heller), основана на осаждении белка азотной к той. Если налить в пробирку несколько куб. ем концентрированной (дымящейся) азотной кислоты и поверх нее осторожно наслаивать исследуемую жидкость так, чтобы оба слоя не смешались, то, в… … Большая медицинская энциклопедия

ГЕЛЛЕРА ПРОБА - [по имени австрийского патолога И. Ф. Геллера (J. F. Heller)], реакция качественного определения белка в моче. Основана на свёртывании белка под действием кислот. На 1—2 мл 50% ного раствора азотной кислоты осторожно наслаивают такое же… … Ветеринарный энциклопедический словарь

- (Urin, Urina, Lotium) жидкость, выделяемая почками; она выносит преимущественно азотистые продукты распада белковых веществ как органов, так и соков тела, а именно: мочевину, мочевую кислоту, креатинин и др.; ей выводятся также и серно кислые… … Энциклопедический словарь Ф.А. Брокгауза и И.А. Ефрона

Занятие №3.

Тема: Определение белка в моче.

Цель: Изучить исследование химических свойств мочи.

Задачи:

Изучить количественные и качественные методы определения белка в моче;

Изучить основные принципы работы с тест-полосками на автоматических анализаторах.

Тип занятия: практическое (6ч)

Планируемые результаты:

Студент должен знать:

Качественные пробы для определения белка.

Метод Робертса – Стольникова.

Определение белка 3 % ССК.

Биуретовый метод определения белка (ТХУ).

Диагностическое значение исследования показателей.

Виды протеинурий.

Студент должен уметь:

Подготовить рабочее место к исследованию мочи.

Приготовить реактивы, посуду и оборудование к исследованию.

Определять химические свойства мочи (белок в моче качественными и количественными методами).

Работать с бланочной продукцией (оформление бланков анализа).

Правильно интерпретировать полученные результаты исследования.

Средства достижения поставленной цели:

1. Работа с конспектами, учебной и специальной литературой.

2. Подготовка к практическим занятиям с использованием методических рекомендаций преподавателя, выполнение и оформление практических работ.

3. Работа с информационными средствами обучения на электронных и бумажных носителях.

Оборудование учебного кабинета и рабочих мест кабинета:

посадочные места по количеству обучающихся;

рабочее место преподавателя;

специализированная мебель и оборудование.

Технические средства обучения:

компьютеры для оснащения рабочего места преподавателя и обучающихся;

технические устройства для аудиовизуального отображения информации;

аудиовизуальные средства обучения (презентация, учебный видеосюжет).

Результатом освоения урока является:

Формирование практических профессиональных умений и первоначального практического опыта, в том числе профессиональными (ПК ) и общими ( ОК ) компетенциями:

ПК 1.1 . Готовить рабочее место для проведения лабораторных общеклинических исследований.

ПК 1.2 . Проводить лабораторные общеклинические исследования биологических материалов.

ПК 1.3 . Регистрировать результаты проведенных исследований.

ПК 1.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты.

ОК 1. Понимать сущность и социальную значимость своей будущей профессии, проявлять к ней устойчивый интерес.

ОК 2 . Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество.

ОК 6. Работать в коллективе и команде, эффективно общаться с коллегами, руководством, пациентами.

ОК 9 . Ориентироваться в условиях смены технологий в профессиональной деятельности.

ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.

I модуль. Теоретическая часть с элементами самостоятельной работы

Задание №1. Изучите и законспектируйте учебный материал в рабочие тетради.

М оча здорового человека обычно содержит менее 0,002 г/л и редко до 0,012 г/л белка и как правило такое содержание белка в моче называют «в виде следов» и общепринятыми (унифицированными) химическими методами в моче здорового человека не определяется.

Содержание белка в порциях мочи, собранной в разное время суток, может колебаться в значительных пределах.

П оявление белка в моче называется протеинурия.

В зависимости от суточной потери белка различают следующие степени протеинурии: умеренная - до 1 г; средняя - от 1 до 3 г; выраженная - более 3 г.

Существует два основных вида протеинурии:

Протеинурии, обусловленные заболеваниями мочевыводящих путей;

протеинурии, при поражениях (заболеваниях) почек.

Протеинурии, связанные с воспалительными процессами мочевыводящих путей, сопровождаются появлением в моче значительного количества лейкоцитов или эритроцитов, что, однако, не позволяет исключить одновременного попадания белка в мочу из почечной паренхимы; содержание белка редко превышает 1 г/л.

Почечная протеинурия в большинстве случаев связана с повышенной проницаемостью гломерул и делится на 2 группы :

физиологическая протеинурия;

патологическая протеинурия.

К физиологической протеинурии относят случаи временного появления белка в моче, не связанные с заболеваниями:

после приема большого количества пищи, богатой не денатурированными белками (сырое мясо, сырые яйца);

при интенсивной мышечной работе (продолжительные походы, спортивные соревнования);

при приеме холодной ванны или душа;

при сильных эмоциональных переживаниях;

при эпилептических приступах.

Различают ортостатическую, или юношескую, протеинурию, встречающуюся у детей и подростков и проходящую с возрастом. В дифференциально - диагностическом отношении имеет практическое значение то, что ортостатическая альбуминурия обнаруживается нередко в период выздоровления после острого гломерулонефрита.

Патологическая почечная протеинурия может быть следствием органических заболеваний почек и других органов и систем: острые гломерулонефриты; хронические гломерулонефриты; острые пиелонефриты; хронические пиелонефриты; нефропатии беременных; различные заболевания, сопровождающиеся лихорадкой; выраженная хроническая сердечная недостаточность; а милоидоз почек; липоидный нефроз; туберкулез почки; геморрагические лихорадки; геморрагический васкулит; выраженная анемия; гипертоническая болезнь и др.

Задание №2. Перепишите и зарисуйте схемы лабораторных методов определения белка в моче.

Лабораторные методы определения белка в моче

Существуют качественные и количественные методы определения белка в моче, они основаны на коагуляции белка в объеме мочи или на границе сред (моча и кислота); при этом измерение степени коагуляции делает пробу количественной.

Качественные методы

проба с 20% сульфосалициловой кислотой (унифицированная);

кольцевая проба Геллера (в настоящее время не используется);

обнаружение белка с помощью индикаторной бумаги (полосок) и тест-полосок.

Количественные методы

унифицированный метод Брандберга-Робертса-Стольникова;

с 3% сульфосалициловой кислотой.

Качественные методы определения белка в моче

Задание №3. Определение белка в моче с помощью у нифицированной пробы с 20% сульфосалициловой кислотой

Принцип метода: основан на коагуляции белка в объеме мочи или на границе сред (моча и кислота)

20% сульфосалициловой кислоты (2-гидрокси-5-сульфобензойная кислота C 7 H 5 0 6 S ).

фильтровальная бумага

3мл профильтрованной мочи

2 шт. химические пробирки

Ход исследования:

В две пробирки вносят по 3 мл профильтрованной мочи, в одну из них (опытную) прибавляют 6-8 капель сульфосалициловой кислоты. На темном фоне сравнивают обе пробирки.

Помутнение в опытной пробирке свидетельствует о наличии в моче белка - проба положительна.

Примечание. Мочу со щелочной реакцией перед исследованием подкисляют добавлением нескольких капель 10% раствора уксусной кислоты

Задание №4. Определение белка с помощью кольцевой пробы Геллера

Принцип метода: В основу положена кольцевая проба, заключающаяся в том, что при добавлении к моче азотной кислоты на границе сред (кислота – моча) при наличии белка происходит его коагуляция и появляется белое кольцо.

Посуда, оборудование и реактивы:

Химическая пробирка;

- реактивы: 30% раствор азотной кислоты ( HNO 3) ( d = 1,2) или реактив Ларионовой : 20- 30 г хлорида натрия (NaCl ) растворяют при нагревании в 100 мл дистиллированной воды, остужают, фильтруют; к 99 мл фильтрата приливают 1 мл концентрированной HNO 3.

Ход исследования:

HNO 3

Интерпретация полученных результатов:

Появление на границе двух жидкостей между 2-й и 3-й мин тонкого белого кольца указывает на наличие белка в моче.

Количественное определение белка

Принцип метода: В основу положена кольцевая проба Геллера, заключающаяся в том, что при добавлении к моче азотной кислоты на границе сред (кислота - моча) при наличии белка происходит его коагуляция и появляется белое кольцо.

Посуда, оборудование и реактивы:

Химическая пробирка;

Реактив Ларионовой;

Фильтровальная бумага;

Биологическая жидкость (моча);

Дистиллированная вода.

Ход исследования:

В пробирку наливают 1 - 2 мл 30% раствора HNO 3 или реактива Ларионовой и осторожно по стенке наслаивают столько же профильтрованной мочи.

Интерпретация полученных результатов:

Появление на границе двух жидкостей между 2-й и 3-й мин
тонкого белого кольца указывает на наличие белка в концентрации примерно 0,033 г/л. При появлении кольца раньше 2-х мин после наслаивания мочу следует развести дистиллированной водой и провести повторное исследование с разведенной мочой. Степень разведения мочи подбирают в зависимости от вида кольца, его ширины, компактности и времени появления.

При нитевидном кольце, появившемся ранее 2 мин, мочу разводят в 2 раза, при широком - в 4 раза, при компактном - в 8 раз и т.д. Концентрацию белка вычисляют, умножив степень разведения на 0,033 г/л.

Примечание:

Белое кольцо может образовываться при наличии большого количества уратов; в отличие от белкового оно появляется немного выше границы двух жидкостей и растворяется при легком нагревании.

Задание №6. Определение количества белка в моче с 3 % сульфосалициловой кислотой

Принцип метода: Концентрация белка в моче пропорциональна помутнению, появляющемуся при его коагуляции сульфосалициловой кислотой

Посуда, оборудование и реактивы:

3% раствор сульфосалициловой кислоты ( C 7 H 5 O 6 S ); j

0,9% раствор хлорида натрия;

1% стандартный раствор альбумина - 1 г лиофилизированного альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9% раствора NaCl в колбе емкостью 100 мл, а затем доводят до метки тем же растворителем. Реактив стабилизируют прибавлением 1 мл 5% раствора азида натрия ( NaN 3). При хранении в холодильнике реактив стабилен в течение 2 месяцев.

Ход исследования:

В пробирку вносят 1,25 мл профильтрованной мочи, добавляют 3,75 мл 3% раствора сульфосалициловой кислоты, перемешивают. Через 5 мин пробу фотометрируют на ФЭКе при длине волны 590-650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете с длиной оптического пути 5 мм. Контролем служит проба, в которой к 1,25 мл мочи добавлено 3,75 мл 0,9% раствора хлорид е натрия. Концентрацию белка рассчитывают по калибровочному графику, для построение которого готовят разведения стандартного раствора альбумина (см. таблицу) . Из каждого полученного разведенного раствора берут по 1,25 мл и обрабатывают, как опытные пробы.

Приготовление разведений для построения калибровочного графика

пробирки

Стандартный раствор, мл

0,9% раствор хлорида натрия, мл

Концентрация белка, г/л

0,05

9,95

0,05

0,1

9,9

0,1

0,2

9,8

0,2

0,5

9,5

0,5

1,0

9,0

1,0

Примечание:

Прямолинейная зависимость величины экстинкции и концентрации белка сохраняется до 1 г/л. При более высоких концентрациях белка пробу следует разводить и учитывать разведение при расчете.

При наличии в моче веществ, содержащих йод, могут быть получены ложноположительные результаты. Поэтому тест нельзя использовать у больных, принимающих препараты йода или прошедших исследование с применением йодсодержащих рентгеноконтрастных соединений. Ложноположительные J реакции при проведении исследования могут быть вызваны приемом сульфаниламидных лекарственных средств, больших доз пенициллина и при высоких концентрациях в моче мочевой кислоты.

Зарисуйте схему определения белка

Задание №7. Обнаружение в моче белка Бенс-Джонса

Принцип метода: основан на реакции термопреципитации

Посуда, оборудование и реактивы:

Реактив: 2М ацетатный буфер рН 4,9.

Профильтрованная моча;

Водянная баня.

Ход исследования:

4 мл профильтрованной мочи смешивают с 1 мл буферного раствора и нагревают 15 мин на водяной бане при температуре 56°С.

Интерпретация полученных результатов:

При наличии в моче белка Бенс-Джонса уже в первые 2 мин появляется выраженный осадок.

Примечание:

При концентрации белка менее 3 г/л проба может быть отрицательна, что встречается довольно редко, так как обычно концентрация белка Бенс-Джонса в моче весьма значительна.

Наиболее достоверно выявление белка Бенс-Джонса осаждением при температуре 40-60°С. Однако в слишком кислой (рН менее 3,0) или слишком щелочной (рН более 6,5) моче, при низкой относительной плотности мочи и низкой концентрации бежа Бенс-Джонса (менее 3 г/л) осаждение может не происходить.

Зарисуйте схему определения белка

II модуль. Самостоятельная работа с исследовательским этапом

Методические установки:

Задание №1. Изучите и законспектируйте приложение №1 «

Задание №2.

Получите образцы биологической жидкости (мочи) у преподавателя, пронумеруйте образцы;

Проведите исследование мочи с помощью диагностических тест-полосок;

Результат запишите в бланки анализа, сдайте их преподавателю.

Приложение №1

« Обнаружение белка с помощью диагностических тест-полосок»

Принцип. Белок изменяет цвет индикатора, нанесенного на полоску. Индикаторы упакованы в комплекте по 100 полосок, которые хранятся в плотно закрытом пенале, прохладном и сухом месте.

Правила работы с диагностическими тест-полосками

При работе с диагностическими тест-полосками необходимо соблюдать следущие правила:

Держать диагностические тест-полоски в плотно закрытых упаковках-пеналах;

Хранить пеналы в темном, сухом, прохладном месте при температуре, не превышающей 30ºС, но не в холодильнике;

Не подвергать полоски действию влаги и прямого солнечного света, высокой температуры и летучих химических веществ;

Доставать только строго необходимое количество полосок, после чего немедленно закрывать пенал;

Не дотрагиваться пальцами до диагностических зон.

Правила проведения теста

1. Для исследования используйте утреннюю мочу, собранную в одноразовый пластиковый контейнер для мочи (или чистую сухую посуду). Перемешайте доставленную мочу, но не центрифугируйте.

В нимание!

При использовании нестандартной приспособленной тары остатки моющих средств в посуде для сбора мочи являются причиной ложных результатов.

2. Из пенала возьмите тест-полоску.

3. Сразу же закройте пенал фабричной крышкой, полоску охраняйте от влаги.

4. Индикаторные бумажные зоны полоски опустите на 2-3 секунды в исследуемую мочу и сразу же выньте.

5. Для удаления избытка влаги с диагностических зон полоски проведите ее длинным краем по краю контейнера (или иной емкости, в которой доставлена моча) или приложите этот край полоски к фильтровальной бумаге.

Смывать с диагностических зон полоски лишнюю мочу нельзя!!!

6. По истечении времени, указанного на этикетке пенала или в инструкции к каждому тесту, сравните цвет соответствующей диагностической зоны с цветной шкалой на этикетке пенала с полосками (эталоном). Порядок проведения теста представлен рисунками 1-7.

7. Реакцию оценивают как положительную или отрицательную. Или выражают в цифровом обозначении в г/л. (см. рисунок №8).

Рис. №8 Оценка результатов исследования

III Модуль. Контрольные вопросы и задания

Ответьте на поставленные вопросы, используя рабочую тетрадь

Расскажите метод определения белка в моче 50% азотной кислотой.

Расскажите метод определения белка в моче 20 % ССК.

Расскажите методику определения белка в моче методом Робетса – Стольникова – Бранберга.

Расскажите методику определения белка в моче диагностическими тест- полосками.

Какие существуют правила работы с диагностическими тест-полосками.

Назовите основные критерии правильно проведенного теста.

Расскажите методику обнаружения в моче белка Бенс-Джонса.

Диагностическое значение определения химических свойств мочи.

Клиническая оценка химических свойств мочи.

Запишите в рабочей тетради термины и дайте им обозначение , используя изученный материал

Домашнее задание:

Знать теоретический и практический материал.

Отвечать на контрольные вопросы.

Знать термины.

Литература для самостоятельной подготовки: И.И.Миронова, Л.А.Романова, В.В.Долгов. Общеклинические исследования: моча, кал, ликвор, эякулят.- М.-Тверь: ООО "Издательство "Триада", 2005

Проба имеет чувствительность 0,033 г/л и используется в клинической диагностике протеинурии . Принцип выявления белка основан на его денатурации под воздействием денатурирующего фактора - концентрированной азотной кислоты или реактива Ларионовой .

Следует отметить, что в моче всегда присутствует некоторое количество белка, но, как правило, его концентрация в моче здорового человека ниже порога чувствительности качественной реакции и не выявляется простыми методами. Для количеств белка свыше 0,033 г/л проба непригодна. При более высоких концентрациях необходимо разбавлять мочу или использовать альбуминометр Эсбаха.

Для определения количества общего белка в моче используются метод, основанный на пробе Геллера - метод Брандберга-Робертса-Стольникова (W. Roberts, 1830-1899, англ. терапевт). Методика предполагает разведение мочи до нижнего предела чувствительности пробы (0,033 г/л) и времени образования кольца в 2-3 минуты.

Ход выполнения анализа

Реактивы: концентрированная (дымящаяся) азотная кислота или реактив Ларионовой. Исследуемая моча должна быть прозрачной и иметь кислую реакцию.

Приготовление реактива Ларионовой

Приготавливают насыщенный раствор хлорида натрия (20-30 г соли растворяют в 100 мл теплой воды, дают отстояться до охлаждения). Надосадочную жидкость сливают и фильтруют. К 99 мл фильтрата добавляют 1 мл концентрированной азотной кислоты (можно заменить 2 мл соляной кислоты).

Техника исследования

В пробирку с 1-2 мл реактива осторожно по стенке наслаивают примерно такое же количество мочи. При наличии белка, примерно через 2-3 минуты, на границе раздела жидкостей наблюдается помутнение - белое кольцо из денатурировашего белка.

Ложноположительный результат может появиться при использовании азотной кислоты, за счет высокой концентрации нуклеоальбуминов или солей уратов. В первом случае оно исчезает при легком покачивании пробирки, а во втором кольцо располагается значительно выше границы раздела сред и исчезает при нагревании; при повторении пробы с разбавленной мочой кольцо не образуется. Иногда также появляется коричневатое пигментное кольцо от окисления урохрома азотной кислотой.

Использование реактива Ларионовой, в отличие от азотной кислоты, имеет ряд преимуществ: на границе наслоения не образуется пигментных колец, а положительный результат дает более четкие белковые кольца.

См. также

Напишите отзыв о статье "Проба Геллера"

Ссылки

Литература

К:Википедия:Статьи без изображений (тип: не указан)

Отрывок, характеризующий Проба Геллера

Граф опять пошел за перегородку и лег. Графиня подошла к Наташе, дотронулась перевернутой рукой до ее головы, как это она делала, когда дочь ее бывала больна, потом дотронулась до ее лба губами, как бы для того, чтобы узнать, есть ли жар, и поцеловала ее.
– Ты озябла. Ты вся дрожишь. Ты бы ложилась, – сказала она.
– Ложиться? Да, хорошо, я лягу. Я сейчас лягу, – сказала Наташа.
С тех пор как Наташе в нынешнее утро сказали о том, что князь Андрей тяжело ранен и едет с ними, она только в первую минуту много спрашивала о том, куда? как? опасно ли он ранен? и можно ли ей видеть его? Но после того как ей сказали, что видеть его ей нельзя, что он ранен тяжело, но что жизнь его не в опасности, она, очевидно, не поверив тому, что ей говорили, но убедившись, что сколько бы она ни говорила, ей будут отвечать одно и то же, перестала спрашивать и говорить. Всю дорогу с большими глазами, которые так знала и которых выражения так боялась графиня, Наташа сидела неподвижно в углу кареты и так же сидела теперь на лавке, на которую села. Что то она задумывала, что то она решала или уже решила в своем уме теперь, – это знала графиня, но что это такое было, она не знала, и это то страшило и мучило ее.
– Наташа, разденься, голубушка, ложись на мою постель. (Только графине одной была постелена постель на кровати; m me Schoss и обе барышни должны были спать на полу на сене.)
– Нет, мама, я лягу тут, на полу, – сердито сказала Наташа, подошла к окну и отворила его. Стон адъютанта из открытого окна послышался явственнее. Она высунула голову в сырой воздух ночи, и графиня видела, как тонкие плечи ее тряслись от рыданий и бились о раму. Наташа знала, что стонал не князь Андрей. Она знала, что князь Андрей лежал в той же связи, где они были, в другой избе через сени; но этот страшный неумолкавший стон заставил зарыдать ее. Графиня переглянулась с Соней.
– Ложись, голубушка, ложись, мой дружок, – сказала графиня, слегка дотрогиваясь рукой до плеча Наташи. – Ну, ложись же.
– Ах, да… Я сейчас, сейчас лягу, – сказала Наташа, поспешно раздеваясь и обрывая завязки юбок. Скинув платье и надев кофту, она, подвернув ноги, села на приготовленную на полу постель и, перекинув через плечо наперед свою недлинную тонкую косу, стала переплетать ее. Тонкие длинные привычные пальцы быстро, ловко разбирали, плели, завязывали косу. Голова Наташи привычным жестом поворачивалась то в одну, то в другую сторону, но глаза, лихорадочно открытые, неподвижно смотрели прямо. Когда ночной костюм был окончен, Наташа тихо опустилась на простыню, постланную на сено с края от двери.
– Наташа, ты в середину ляг, – сказала Соня.
– Нет, я тут, – проговорила Наташа. – Да ложитесь же, – прибавила она с досадой. И она зарылась лицом в подушку.

Принцип метода:

Относительная плотность мочи составляет в норме 1,015-1,025 г/см 3 . Определение относительной плотности мочи производят с помощью специальных ареометров небольшого размера, называемых урометрами. Урометры бывают двух типов: первый - для мочи с низкой и нормальной относительной плотностью (с делениями от 1,000 до 1,030 г/см 3), второй - для мочи с высокой относительной плотностью (с делениями от 1,030 до 1,060 г/см 3).

ХОД РАБОТЫ

В небольшой цилиндр с таким диаметром, чтобы урометр свободно плавал в нем, наливают по стенке исследуемую мочу и осторожно погружают в нее урометр. Производят отсчет, беря ту линию на шкале урометра, которая соответствует нижнему мениску жидкости. Все определения производят при температуре 20 0 С, поскольку шкала урометра проградуирована в соответствии с этой температурой. Если моча имеет другую температуру, то на каждые 3 0 С свыше этой температуры нужно прибавить, а на каждые 3 0 С ниже – убавить по 0,001 от показания шкалы урометра.

Обнаружение патологических компонентов мочи

1. Качественные реакции на обнаружение белка в моче – а) проба Геллера с концентрированной азотной кислотой

Принцип метода:

Концентрированная минеральная кислота НNO 3 вызывает денатурацию белка и образует комплексные соли белка с кислотой. На границе двух слоев жидкостей образуется осадок в виде небольшого белого кольца.

Ход работы

В пробирку наливают 1 мл концентрированной НNO 3 , наклоняют пробирку под углом 45 0 и осторожно по стенке пипеткой наслаивают 1мл мочи.

б) проба с концентрированной сульфосалициловой кислотой

Принцип метода:

Концентрированная органическая сульфосалициловая кислота вызывает денатурацию белка. Выпадение белка в виде осадка или мути связано с дегидратацией белковых частиц и образованием комплексных солей белка с кислотами.

Ход работы

К 1 мл мочи приливают 3 капли 20% сульфосалициловой кислоты. При наличии белка в моче образуется белый осадок.

2. Количественное определение белка в моче с помощью

тест – полоски «Альбуфан» .

Принцип метода:

Тест основан на принципе «белковой ошибки индикатора». Реактивная зона содержит кислородный буфер и специальный индикатор, который в присутствии белков меняет цвет с желтого через зеленый до синего.

Тест высокочувствителен к альбумину и реагирует на его присутствие в моче при концентрации 0,10-0,15 г/л. Высокомолекулярные белки, такие как иммуноглобулины, измеряются с меньшей чувствительностью, чем альбумины. Низкомолекулярные белки, такие как бета-2 микроглобулин, белок Бенс -Джонса практически не выявляется этим тестом.

Оценка теста: положительным тест считается в том случае, если меняется цвет реактивной зоны. В зависимости от концентрации альбумина в моче реактивная зона может приобретать оттенок от зеленого до синего. Эти оттенки сравниваются с цветной шкалой, зоны которой соответствуют концентрации белка 0,3, 1, 3, 10 г/л.

ХОД РАБОТЫ

Тест-полоску, не касаясь реактивной зоны руками, опустить на 1-2 секунды в исследуемую мочу так, чтобы зона была смочена. Затем удалить излишки мочи с полоски и приблизительно через 1 минуту сравнить окраску зоны индикации с цветной шкалой на наборе и определить количество белка, которое выражено в г/л.

Кольцевая проба Геллера относится к качественным реакциям определения белка в моче . Так как она основана на реакции коагуляции, то исследуемая моча должна соответствовать определенным требованиям: быть прозрачной и иметь кислую реакцию.

Реактивы

Концентрированная (или 50%-я) азотная кислота или реактив Ларионовой . Приготовление реактива Ларионовой: готовят насыщенный раствор хлорида натрия (20 – 30 г соли растворяют в 100 мл воды при подогревании, дают отстояться до охлаждения). Надосадочную жидкость сливают, фильтруют. К 99 мл фильтрата добавляют 1 мл концентрированной азотной кислоты. Вместо азотной кислоты можно добавить 2 мл концентрированной соляной кислоты.

Ход определения

В пробирку наливают 1 – 1,5 мл азотной кислоты или реактива Ларионовой и пипеткой осторожно по стенке пробирки наслаивают такое же количество мочи, стараясь не взбалтывать жидкость в пробирке. При наличии белка на границе двух жидкостей появляется белое кольцо. Реакцию оценивают на черном фоне и учитывают время появления нитевидного кольца. Чувствительность пробы 0,033 г/л. При таком содержании белка на границе жидкостей появляется белое нитевидное кольцо между 2-й и 3-й минутами.

Недостатки пробы Геллера

• постановка пробы является достаточно трудоемкой и длительной процедурой, требующей концентрированной азотной кислоты;
• иногда при постановке пробы появляется пигментное (коричневатое) кольцо от окисления урохрома азотной кислотой, которое может мешать определению белка;
• в моче, содержащей ураты, иногда появляется беловатое кольцо выше границы жидкостей (уратное кольцо, в отличие от белкового, растворяется при легком нагревании);
• проба выдает ложноположительные результаты при высокой концентрации мочевой кислоты , мочевины и т. д.

Проба Геллера с реактивом Ларионовой

Более четкий результат пробы Геллера получается, если использовать реактив Ларионовой. Проба с реактивом Ларионовой имеет ряд преимуществ:

• на границе наслоения не бывает пигментных колец, которые часто образуются при наслаивании мочи на азотную кислоту и мешают распознаванию белкового кольца;
• кольца получаются более четкие, чем с азотной кислотой;
• экономится азотная кислота;
• реактив более удобен в работе: попадая на ткань, не прожигает ее.